转基因构建Cry1Ac基因-NOS终止子染料法qPCR试剂盒操作方法

转基因构建Cry1Ac基因-NOS终止子染料法qPCR试剂盒操作方法：

1 确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中，向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。

2 将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。

3  12,000 rpm离心1min，弃滤液。

注：此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

若溶液体积大于纯化柱容积（800 μl），可分两次离心。

4 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

注：溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质，以获得高质量DNA片段。

5 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

6  12,000 rpm 离心 3min，以彻底去除纯化柱中的液体。

注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

7 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处，悬空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃预热），静置2min。12,000 rpm 离心1min，管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。

注：溶液Eluent可用无菌双蒸水代替，但其pH需为8.0-8.5，加入体积视DNA目的片段、用户对目的片段浓度要求而定。

产品仅用于科研对溶液Eluent 60℃预热，会提高提取DNA目的片段的产量。