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油菜内标准HMG I/Y 基因探针法PCR试剂盒操作方法

发表时间:2020-11-23

油菜内标准HMG I/Y 基因探针法PCR试剂盒操作方法:


1  确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中,向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。


2  将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。


3  12,000 rpm离心1min,弃滤液。


   注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。


       若溶液体积大于纯化柱容积(800 μl),可分两次离心。


4  加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。


   注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。


       此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,以获得高质量DNA片段。


5  加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。


6  12,000 rpm 离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。


   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。


7  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 μl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。


   注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段、用户对目的片段浓度要求而定。


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